色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離子交換樹脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10um等,柱效理論值可達5~16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數的柱效;對于同系物分析,只要500即可;對于較難的分離物質對則可采用高達2萬的柱子,因此一般10~30cm左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。
液相色譜柱的柱效受柱內外因素影響,為使色譜柱達到較佳效率,除柱外死體積要小外,也要有合理的柱結構(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術。即使較好的裝填技術,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應。這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍料徑的厚度。在一般的液相色譜系統中,柱外效應對柱效的影響遠遠大于管壁效應。
液相色譜柱的規則:
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類
?、俪R幏治鲋?常量柱),內徑2~5mm,柱長10~30cm;
②窄徑柱(narrowbore),內徑1~2mm,柱長10~20cm;
?、勖毠苤?又稱微柱microcolumn),內徑0.2~0.5mm;
?、馨胫苽渲?,內徑>5mm;
⑤實驗室制備柱,內徑20~40mm,柱長10~30cm;
?、奚a制備柱內徑可達幾十厘米。